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    LeapWal PolyShooter 轉染試劑 P09110轉染步驟

    更新時間:2022-07-19 點擊量:911
      LeapWal PolyShooter 轉染試劑 P09110的原理時帶正電的DEAE-葡聚糖與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成復合物通過細胞內吞噬作用而使DNA轉導進入細胞核。此法只適合瞬時轉染實驗,轉染效率與DEAE-葡聚糖的濃度以及細胞與DNA/EDAE-葡聚糖混合液接觸時間的長短有關,可采用較高濃度的DEAE-葡聚糖(1g/L)作用較短時間(0.5-1.5h),也可用較低濃度(250mg/L)的DEAE-葡聚糖坐擁較長時間(8h)。
     
      脂質體是由脂質雙分子層組成的、內部為水相的封閉囊泡結構。脂質體的水相可以包裹多種物質。DNA與脂質體混合后可被包裹在脂質體的水相中。當脂質體與轉染的細胞的細胞膜接觸時。其脂質雙分子層與細胞膜融合,脂質體水相中的DNA進入細胞內部,細胞被轉染。
     
      LeapWal PolyShooter 轉染試劑 P09110 轉染步驟:
      1.轉染前一天,胰酶消化細胞并計數,細胞鋪板,使其在轉染日密度為90-95%。細胞鋪板在2ml含血清,不含抗生素的正常生長的培養基中。
      2.對于每孔細胞,使用250ul無血清培養基(如OPTI-MEMI培養基)稀釋4.0ugDNA輕輕混勻。
      3.使用前將PolyShooterP09110轉染試劑輕輕混勻,用250ul無血清培養基(如OPTI-MEMI 培養基)稀釋10ulPolyShooterP09110轉染試劑,輕輕混勻。PolyShooterP09110稀釋后,在5分鐘內同稀釋的DNA昆合(<30分鐘)。NOTE 若使用DME培養基,貝U需在5分鐘內同稀釋的DNA昆合。
      4.混合稀釋的DNA(第二步)和稀釋的PolyShooterP09110(第三步)。室溫放置20分鐘。
      5.(optional)將6孔板中的舊營養液吸出,用無血清培養基清洗兩次。加入2ml無血清配養基。

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